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植物高爾基體提取試劑盒-非酶法
植物高爾基體提取試劑盒
試劑盒儲(chǔ)存條件:
【注】:2-8℃ 保存。
試劑瓶開蓋后各組份按要求條件保存。
拆封后請(qǐng)盡快使用完!
試劑盒組成:
產(chǎn)品組成 組份編號(hào) 有效期:
規(guī)格 50T 100T
試劑
A:高爾基體提取液A 25ml 40ml 36042A
試劑
B:高爾基體提取液B 25ml 50ml 36042B
試劑
C:試劑WT 1ml 1ml 36042C
試劑
D:高爾基體保存液D 10ml 20ml 36042D
使用說(shuō)明書一年。
植物高爾基體提取試劑盒-非酶法
【注】:
有效期為試劑盒未拆封前按要求條件保存的有效期。
試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完!
注意事項(xiàng):
1.正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn),以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,取得最佳實(shí)驗(yàn)效果。
2.螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時(shí)試劑損失。
3.禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果。
4.樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5.最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6.實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
試劑盒以外自備儀器和試劑耗材:
植物高爾基體提取試劑盒提供全套試劑,適用于從各種新鮮植物組織樣本中提取高爾基體。
本試劑盒提取的高爾基體具有完整的活性和功能,可以用于各種下游應(yīng)用。
除了高爾基體提取試劑盒,還有細(xì)胞核提取、線粒體提取等各種亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的提取試劑盒以及相關(guān)的蛋白質(zhì)提取試劑盒。
試劑盒以外自備儀器和試劑耗材:
植物高爾基體提取試劑盒提供全套試劑,適用于從各種新鮮植物組織樣本中提取高爾基
體。
本試劑盒提取的高爾基體具有完整的活性和功能,可以用于各種下游應(yīng)用。
除了高爾基體提取試劑盒,還有細(xì)胞核提取、線粒體提取等各種亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的提取試劑
盒以及相關(guān)的蛋白質(zhì)提取試劑盒。
儀器:
離心機(jī)
振蕩器
渦旋混勻器
Dounce勻漿器
移液器
冰箱
冰盒
試劑:PBS (pH7.4,實(shí)驗(yàn)室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液(1X)) (phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS:約含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mMNaCl和3mM KCl)
耗材: 離心管 吸頭
使用方法:
使用注意事項(xiàng):
旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開蓋時(shí)液灑落。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷;所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。最好使用 Dounce 勻漿器勻漿,如果沒有 Dounce 勻漿器,用普通玻璃勻漿器勻漿也可,但是高爾基體回收率會(huì)下降。
1. 取 200-500mg 新鮮植物葉片組織樣本,用 PBS 洗滌干凈。
2. 用剪刀盡可能剪碎,用冷 PBS 洗滌兩次。
植物高爾基體提取試劑盒-(非酶法)
【注】:
也可用刀片將葉片樣本切成小塊。
3. 加入 500μl 冷的試劑 A,置冰上 10 分鐘。
4. 用 Dounce 勻漿器充分勻漿 30-40 次。
【注】:
每上下一個(gè)來(lái)回為一次。
也可以用電動(dòng)勻漿機(jī)充分勻漿。
5. 將勻漿液在 4℃,1000g 力條件下離心 10 分鐘。棄沉淀,收集上清。
6. 將上清在 4℃,3000g 力條件下離心 10 分鐘。棄沉淀,收集上清。
7. 將上清在 4℃,6000g 力條件下離心 10 分鐘。棄沉淀,收集上清。
8. 在上清中加入 10ul 試劑WT,在 4℃,50000g 力條件下離心 20 分鐘。
【注】:
沒有 50000g 離心條件,可以降低離心力。
至少要保證 20000g 以上離心力。
降低離心力后高爾基體回收率會(huì)下降。
9. 棄上清,在沉淀中加入 500μl 冷的試劑 B,混勻。
10. 在 4℃,50000g 力條件下離心 30 分鐘。棄上清,收集沉淀。
【注】:
沒有 50000g 離心條件,可以降低離心力。
至少要保證 20000g 以上離心力。
降低離心力后高爾基體回收率會(huì)下降。
11. 沉淀用高爾基體保存液重懸保存或直接用于下游實(shí)驗(yàn)應(yīng)用。
【注】:
可以不用試劑盒中提供的保存液。
根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用自己的其他緩沖液保存或直接用于下
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