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人蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)ELISA檢測試劑盒本生生物公司供應(yīng):ELISA試劑盒,血清,熒光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量離心管,進(jìn)口凍存管,細(xì)胞培養(yǎng)皿,培養(yǎng)板,培養(yǎng)瓶,吸頭,儀器及手套,色譜耗材,針頭過濾器。
貨號:BS-1477
規(guī)格:96T/48T
產(chǎn)品名:人蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)ELISA試劑盒
檢測種屬:人、大小鼠、豚鼠、兔子、豬、犬、牛羊、雞鴨、猴ELISA試劑盒等種屬。
保存條件及有效期:
1、試劑盒保存:2-8℃。
2、有效期:6個(gè)月
標(biāo)記物:血清、血漿、組織勻漿等
【測試種屬】犬、大小鼠、人、豚鼠、兔子、牛羊、豬、雞鴨elisa試劑盒等種屬
【儲存方式】:2-8℃
【檢測目的】用于測定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本。
【用途】科研實(shí)驗(yàn),不用于臨床診斷。
人ELISA試劑盒 人ELISAkit 試劑盒代測 蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)
人蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)ELISA檢測試劑盒
樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
人蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)ELISA試劑盒操作步驟:
人蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)ELISA試劑盒組成:
試劑盒組成48 孔配置96 孔配置保存
說明書1 份1 份
封板膜2 片(48)2 片(96)
密封袋1 個(gè)1 個(gè)
酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品:540μg/L0.5ml×1 瓶0.5ml×1 瓶2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1 瓶1.5ml×1 瓶2-8℃保存
酶標(biāo)試劑3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
樣品稀釋液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
顯色劑 A 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
顯色劑 B 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
終止液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
濃縮洗滌液(20ml×20 倍)×1 瓶(20ml×30 倍)×1 瓶2-8℃保存
人蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)ELISA試劑盒ELISA測定的影響做如下討論。
血清是常用的ELISA標(biāo)本,血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本,標(biāo)本引起的假陽性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致,分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種:
1. 內(nèi)源性物質(zhì) 有人認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì),可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有:類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig (s)抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。
外源性物質(zhì)
2. 外源性物質(zhì)常常是由于用于ELISA測定的血標(biāo)本的采集、貯存等不當(dāng)所致。如標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存過久、標(biāo)本凝集不全和采血管中添加物等影響。
(1)標(biāo)本溶血 由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血,均可因紅細(xì)胞破壞溶解時(shí)釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白,在以辣根過氧化物酶為標(biāo)記的ELISA測定中,會導(dǎo)致非特異性顯色,干擾測定結(jié)果。為克服上述干擾作用,標(biāo)本采集時(shí)必須注意避免溶血。
(2)標(biāo)本受細(xì)菌污染 因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶,因此,被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。
(3)標(biāo)本保存不當(dāng) 在冰箱中保存過久的標(biāo)本,血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體,在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、甚至造成假陽性;標(biāo)本放置時(shí)間過長(如一天以上),有時(shí)抗原或抗體免疫活性減弱,亦可出現(xiàn)假陰性。為克服上述干擾,ELISA測定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集;如不能立即測定,5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃,1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標(biāo)本,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混合后再測定,但混勻時(shí)應(yīng)輕柔,不可強(qiáng)烈振蕩。
(4)標(biāo)本凝集不全 在沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下,正常血液采集后1/2~2h開始凝固,18~24h*凝固。臨床檢驗(yàn)工作中,有時(shí)為了爭取時(shí)間快速檢測,常在血液還未開始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清,此時(shí)的血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結(jié)果;這類情況于次日復(fù)查時(shí)因血凝已*,血清中不再有纖維蛋白原存在,故復(fù)查結(jié)果變?yōu)殛幮浴楸苊馍鲜龈蓴_作用,解決的辦法是血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清,或標(biāo)本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?/p>
(5)標(biāo)本管中添加物質(zhì)的影響 抗凝劑(如肝素,EDTA)、酶抑制劑(如NaN3可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性)及快速分離血清的分離膠等均對ELISA測定有一定干擾作用。 綜上所述,對臨床檢驗(yàn)ELISA測定中出現(xiàn)的假陽性或假陰性結(jié)果,在考慮試劑因素和操作因素之外,更多的應(yīng)從標(biāo)本因素方面進(jìn)行分析,并應(yīng)采取相應(yīng)措施排除干擾作用,從而為臨床提供正確可靠的檢測結(jié)果。
產(chǎn)品用途:可用于科研實(shí)驗(yàn),不用于臨床治療!
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