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Elisa實驗:ELISA不顯色成白板怎么破?
在做ELISA實驗中,相信大家或多或少難免會出現(xiàn)一些狀況,就在上周五,本生小編就客戶問題:ELISA實驗,到顯色步驟結(jié)束后,酶標(biāo)板所有孔均無顏色。陽性對照不顯色。BUNSEN本生技術(shù)小編就此問題分析如下:
分析原因:試劑已過有效期,或不同試劑盒組分混用,檢查試劑的組分及批號,確認(rèn)未過期以及所有組分均屬對應(yīng)的試劑盒。
對策:不同試劑盒或不同批號的試劑不能混用。
整板的黃板現(xiàn)象可能是由于錯加其他試劑造成,如同時操作兩對半試劑時,測HbsAb板用于測HBsAg等;實驗檢查試劑的組分及批號,確認(rèn)所有組分均屬于對應(yīng)的試劑盒。如盛標(biāo)本的試管四周常有血痂,易脫落,應(yīng)遠(yuǎn)離酶標(biāo)板。
elisa試劑盒超過有效期的產(chǎn)品可能會產(chǎn)生很弱的信號;試劑盒沒有按規(guī)定進行留存,受高溫影響;實驗檢查試劑的組分及批號,確認(rèn)試劑未過期。孵育溫度應(yīng)控制在37-38℃,孵育時間嚴(yán)格按照說明書操作,保溫期內(nèi)不宜多開門,以免影響保溫。花板,一般是由于臨床標(biāo)本的收集、處理和留存方法不當(dāng)造成,放置時間(自然放置1~2h)及離心轉(zhuǎn)(3000r/min)、離心時間(15min)應(yīng)引起注意。
試劑、樣品用未平衡至室溫從低溫冰箱中取出的試劑及樣品應(yīng)置室溫平衡,20分鐘左右。錯加、漏加試劑底物、顯色劑A或B嚴(yán)格按說明書的步驟操作,加完試劑后可觀察一下液面高度是否一致,以減少漏加現(xiàn)象。實驗結(jié)束后,陰陽性對照正常,質(zhì)控正常,但臨床標(biāo)本感覺顯色較弱,待測標(biāo)本中可能不含強陽性標(biāo)本,故結(jié)果可能是正常的,如有懷疑,可復(fù)檢標(biāo)本加入疊氮鈉作為防腐劑,酶免實驗中的標(biāo)本禁用疊氮鈉作為防腐劑,可選用 proclin、硫柳汞等其他防腐劑,陰陽性對照正常,但質(zhì)控、參考品或個別弱陽性標(biāo)本未能檢出。
標(biāo)簽:酶標(biāo)板 Elisa 試劑盒 試劑 本生 血清 試劑 抗體
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